Меню
Главная
Авторизация/Регистрация
 
Главная arrow Агропромышленность arrow Ветеринарная иммунология (теория и практика)

Определение антителообразующих клеток

В экспериментальных исследованиях на линейных мышах и крысах для оценки первичного (IgM и IgG) и вторичного (IgG) ответа натимусза- висимый или тимуснезависимый антиген используется метод определения количества антителообразующих клеток in vivo в камере (или агаре). 112

Первичный (IgM) гуморальный иммунный ответ in vivo

Количество АОК, синтезирующих антитела класса IgM (IgM-AOK),

в селезенке мышей оценивают на пике иммунного ответа на 4—5-е сут после внутривенной иммунизации животных эритроцитами барана (ЭБ) в дозе 107 ЭБ/мышь по количеству локальных зон гемолиза в полужидкой среде. У мышей после шейной дислокации извлекают селезенку и помещают в пенициллиновый флакон с 0,5 мл среды 199. Каждую селезенку помещают в отдельный флакон. Все процедуры с клетками проводят на льду. Объем клеточной суспензии доводят до 5 мл. Клетки разводят средой до необходимой концентрации. Затем готовят инкубационную смесь: 300 мкл среды, 100 мкл суспензии ЭБ (4 • 109 ЭБ/мл), 100 мкл сыворотки морской свинки, предварительно разведенной в 1,5 раза, и 500 мкл клеточной суспензии. Компоненты перемешивают, и смесь заливают в стеклянные камеры (по две камеры на каждое животное, учитывая среднее), сделанные из двух предметных стекол, склеенных смесью воска с парафином вдоль продольных сторон. Учитывается объем камеры. Камеры помещают в термостат и инкубируют 90 мин при 38 °С. После инкубации подсчитывают зоны гемолиза под бинокулярной лупой (увеличение х42) по формуле

где N — количество антителообразующих клеток в 1 мл суспензии; п — количество учтенных антителообразующих клеток в камере; V — объем клеточной суспензии, мл (или мкл); Р — кратность разведения приготовленного раствора (суспензии); Vc объем камеры, мл (или мкл).

 
Посмотреть оригинал
Если Вы заметили ошибку в тексте выделите слово и нажмите Shift + Enter
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >
 

Популярные страницы