Меню
Главная
Авторизация/Регистрация
 
Главная arrow Агропромышленность arrow Ветеринарная иммунология (теория и практика)

Метод флуоресцирующих антител (МФА), иммуноферментный анализ (ИФА)

Метод флуоресцирующих антител

Метод флуоресцирующих антител или реакция иммунофлуоресценции (РИФ) основаны на соединении АГ бактерий, риккетсий и вирусов со специфическими АТ, меченными флуоресцирующими красителями (флуоресцеинизотиоцианатом, родамином, В-изотиоцианатом, лиссамин-родамином В-200, сульфохлоридом и др.), имеющими реакционноспособные группы (сульфохлорид, изотиоцианат и др.). Эти группы соединяются со свободными аминогруппами молекул АТ, которые не теряют при обработке флуорохромом специфического сродства к соответствующему АГ. Образовавшиеся комплексы АГ—АТ под люминесцентным микроскопом становятся хорошо видимыми, ярко светящимися структурами.

Преимущество РИФ — простота, высокая чувствительность, скорость получения результата. РИФ применяется как метод ранней экспресс-диагностики гриппа, дизентерии, малярии, чумы, туляремии, сифилиса и др. РИФ используется для выявления аутоАТ к гладкой мускулатуре, митохондриям, антиядерных, антинуклеарных и других

АТ. Для их обнаружения в сыворотке крови больного обычно используют срезы желудка и почки крыс.

При некоторых заболеваниях внутренних органов, в развитии которых имеет значение процесс иммунного воспаления или иммунной агрессии, в сыворотке крови можно обнаружить ауто АТ к гладкой мускулатуре, эритроцитам, иммуноглобулинам, митохондриям, антиядерные (антинуклеарные) АТ, АТ к ДНК, противоопухолевые АТ и др. Самым распространенным тестом обнаружения аутоАТ в исследуемой сыворотке является метод иммунофлуоресценции, имеющий несколько модификаций. При прямой иммунофлуоресценции (ПИФ) (рис. 9.5) к исследуемому препарату (например, срезам тканей), содержащему искомый АГ, добавляют антисыворотку с АТ к этому АГ. Предварительно АТ метят флуорохромом. В результате взаимодействия АГ и АТ образуется иммунный комплекс, который фиксируется только в тех участках ткани, в которых имеется данный АГ. Эти участки легко обнаруживаются при микроскопии в ультрафиолетовом свете по характерному свечению — флуоресценции.

При использовании метода ПИФ относительно часто получают также ложноположительные результаты, поэтому его предлагается применять только как ориентировочный (скрининговый) метод выявления патогена. Получение ложноположительных результатов может быть обусловлено прежде всего низким качеством диагностических наборов и субъективным характером трактовки получаемых данных.

В клинической практике чаще используют метод непрямой иммунофлуоресценции (НИФ). На срезы тканей различных органов животных, содержащих известные АГ, наносят исследуемую сыворотку (рис. 9.6, а). Если в ней содержатся АТ (иммуноглобулины) к данному тканевому АГ, то происходит реакция связывания АТ с АГ (рис. 9.6, б). Несвязавшиеся белки тщательно отмывают и на срезы тканей наносят противочеловеческую IgG-антисыворотку, меченную флуорохромом (рис. 9.6, в). В результате АТ с флуорохромной меткой против человеческих иммуноглобулинов (например, против IgG), содержащиеся в антисыворотке (АТ к АТ-иммуноглобулинам класса G), связываются только с иммуноглобулинами (АТ), которые присутствовали в исследуемой сыворотке больного и остались фиксированными на соответствующих (известных) АГ ткани (рис. 9.6, г). Люминесценция этих фиксированных АТ хорошо выявляется при микроскопии ткани в ультрафиолетовом свете.

Таким образом, на первом этапе НИФ происходит как бы «закрепление» АТ больного в тех местах ткани, в которых локализованы соответствующие АГ, а на втором этапе — их обнаружение с помощью АТ сыворотки к этим иммуноглобулинам, меченных флуорохромом.

Метод ПИФ (по Бургасовой и Безденежных,1969)

Рис. 9.5. Метод ПИФ (по Бургасовой и Безденежных,1969)

Б. Схема НИФ (по Бургасовой и Безденежных, 1969)

Рис. 9.Б. Схема НИФ (по Бургасовой и Безденежных, 1969): а — нанесение исследуемой сыворотки на срезы тканей с известным АГ; б — реакция связывания АТ с АГ; в — внесение стандартной антисыворотки, содержащей АТ к иммуноглобулинам человека, меченные флуорохромом; г — фиксация этих АТ на АТ к искомому АГ

 
Посмотреть оригинал
Если Вы заметили ошибку в тексте выделите слово и нажмите Shift + Enter
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >
 

Популярные страницы