Меню
Главная
Авторизация/Регистрация
 
Главная arrow Агропромышленность arrow Ветеринарная иммунология (теория и практика)

Реакция преципитации (РП)

РП основана на том, что при соединении антигена (преципитиноге- на) со специфическими антителами (преципитинами), находящимися в соответствующей сыворотке, образуется осадок—преципитат. В РП используют растворимые антигены, получаемые путем экстракции из разрушенных бактерий или извлеченные из тканей. Преципити- ногены резистентны к действию высокой температуры (кипячению, автоклавированию) и гниению. Постановка РП может осуществляться в пробирках в жидкой среде и в чашках Петри (или на предметном стекле) в плотной агаровой среде (диффузионная преципитация).

В ветеринарии обычно используют реакцию кольцепреципитации по Асколи (с целью диагностики сибирской язвы). Для постановки реакции кольцепреципитации не используют специфическую пре- ципитирующую сыворотку биофабричного производства. Антигеном в РП служит фильтрат живой или убитой нагреванием микробной культуры или экстракт из исследуемого материала. Экстрагирование производят либо кипячением, либо длительным (18—24 ч) настаиванием на физиологическом растворе NaCl при комнатной температуре. Экстракт фильтруют через асбестовую вату до полной прозрачности.

В пробирки Уленгута диаметром 4 мм пастеровской пипеткой наливают 0,3—0,4 мл сыворотки. Одновременно в шести пробирках ставят контрольные реакции (рис. 9.14). Антиген (другой пипеткой) осторожно добавляют (наслаивают), пуская его по стенке пробирки, не касаясь пипеткой сыворотки. Пробирку держат вертикально. Если же в пробирку сначала внести антиген, то сыворотку нужно подслаивать под антиген. Для этого, чтобы предотвратить смешение компонентов, пипетку с сывороткой опускают на дно пробирки и осторожно выливают столько сыворотки, сколько антигена (сыворотка имеет большую плотность). В том и другом случае при положительном результате на границе двух жидкостей почти сразу или в течение 1 —2 мин образуется резко отграниченное беловатое кольцо или диск — преципитат.

Реакцию диффузионной преципитации осуществляют путем наслаивания антигена на поверхность агара, содержащего специфическую сыворотку, или путем внесения сыворотки в специальные лунки в агаре, содержащем антиген (по Аухтерлони, 1948) (рис. 9.15).

Метод дифузионной преципитации получил широкое использование. В застывшем в чашках Петри или на предметном стекле агаровом геле делают углубления (луночки) на некотором расстоянии друг от друга. В одну из них вносят специфическую сыворотку, в другие, расположенные вокруг первой, — разные пробы антигена (исследуемый материал). Оба компонента в луночках (сыворотка и исследуемый материал) диффундируют во встречном направлении в слое агарового геля. На месте встречи специфических антиген—антитело выпадает сероватый преципитат.

Реакция преципитации

Рис. 9.14. Реакция преципитации:

1 — преципитирующая сыворотка + исследуемый материал; 2 — преципитирующая сыворотка + гомологичный преципитиноген; 3 — преципитирующая сыворотка + контрольный экстракт без антигена; 4 — преципитирующая сыворотка + изотонический раствор хлорида натрия; 5 — нормальная сыворотка + исследуемый антиген; 6 — нормальная сыворотка + контрольный экстракт без антигена

РП в геле по Аухтерлони

Рис. 9.15. РП в геле по Аухтерлони:

  • 1 — лунки со сравниваемыми антигенами (периферические); 2 — полосы преципитации;
  • 3 — пластинка агарового геля; 4 — лунка с иммунной сывороткой

Полосы преципитации образуются только в зоне эквивалентности, т.е. там, где все антитела связаны с антигеном. (Если в жидкой среде соединить эквивалентные количества реагентов, то в надосадочной жидкости после формирования преципитата не будет свободных антигена и антител.)

При изучении в РДП различных антигенов возможнытри варианта результата реакции (рис. 9.16, 9.17 и 9.18).

  • 1. Реакция идентичности: слияние линий преципитации, относящихся к двум соседним антигенам (у сравниваемых антигенов гомологичные детерминанты — антигены оценивают как идентичные).
  • 2. Реакция неидентичности: пересечение линий преципитации (у сравниваемых антигенов нет гомологичных антигенных детерминант).
  • 3. Реакция неполной идентичности: неполное пересечение линий преципитации с формированием так называемой «шпоры». Такая картина возникает, когда у одного из антигенов помимо гомологичных 162

есть и специфические детерминанты, которые второй антиген в составе своей молекулы не несет.

Б. РДП. 1-й вариант

Рис. 9.1Б. РДП. 1-й вариант.

Линии преципитации сливаются, сравниваемые антигены идентичны:

АГ-а, АГ-а — сравниваемые антигены; АТ — антитела к сравниваемым антигенам; ЛП —линия преципитации

РДП. 2-й вариант

Рис. 9.17. РДП. 2-й вариант.

Линии преципитации пересекаются — «реакция неидентичности», у сравниваемых антигенов нет гомологичных антигенных детерминант:

АГ-э, АГ-е — сравниваемые антигены; АТ — антитела к сравниваемым антигенам; ЛП — линия преципитации

РДП. 3-й вариант

Рис. 9.18. РДП. 3-й вариант.

Линии преципитации частично сливаются, у сравниваемых антигенов гомологичные (общие) и гетерологичные детерминанты:

АГ-а, АГ-б — сравниваемые антигены; в — гомологичная (общая) антигенная детерминанта в сравниваемых антигенах; а — специфическая антигенная детерминанта антигена АГ-ав; АТ-эб — антитела к антигенам АГ-зб, АГ-б; ЛП-б — линия преципитации гомологичных антигенов в; ЛП-э — линия преципитации антигена а — «шпора»

С помощью реакции диффузионной преципитации можно обнаруживать антитела в сыворотке крови и определять их титр. В этом случае в центральную лунку вносят известный растворимый антиген (бактериальный, вирусный), а в периферические — различные разведения исследуемой сыворотки крови (рис. 9.19).

Чтобы полосы преципитации стали более выраженными, пластины обрабатывают солями кадмия. Пластины с готовым гелем отмывают в физиологическом растворе и заливают 0,65%-м раствором сульфата кадмия. В результате через несколько минут полосы преципитации становятся более (в несколько раз) ярко выраженными.

РДП. Обнаружение антител в исследуемой сыворотке крови

Рис. 9.19. РДП. Обнаружение антител в исследуемой сыворотке крови:

С1 : 2 - С1 : 256 — разведения исследуемой сыворотки крови;

АГ — известный микробный антиген; ЛП — линия преципитации.

Титр сыворотки в данном случае составляет 1 : 64

Для РП должна быть нейтральная среда. В кислой среде образуется неспецифический осадок. Щелочная среда тормозит проявление специфической РП.

 
Посмотреть оригинал
Если Вы заметили ошибку в тексте выделите слово и нажмите Shift + Enter
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >
 

Популярные страницы