МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ИЗУЧЕНИЕ АДСОРБЦИИ МИКОБАКТЕРИИ НА ТВЕРДЫХ ПОВЕРХНОСТЯХ

Изучение адсорбционной способности по отношению к микобактериям проведено в трех сериях опытов: на поверхности предметного стекла, почвенными фракциями различного гранулометрического состава и участками двух почвенных горизонтов (А и В) высотой до 10 см семи типов почв^[1].

Адсорбцию микобактерий на стекле исследовали у трех видов: Mycobacterium bovis var. BCG, Mycobacterium avium и Mycobacterium fortuitum. Суспензии вышеуказанных видов микобактерий в концентрации 0,005 мг/мл готовили по стандарту мутности в дистиллированной воде с различной реакцией среды (pH 5,0; 7,0 и 9,0). Всего было приготовлено девять суспензий.

Микробную суспензию концентрацией 0,005 мг/мл в количестве по 0,1 мл наносили на площадь 4 см^? шести обезжиренных предметных стекол. Подсушивание суспензий проводили при разных температурных режимах: 20°С, 30 и 40°С. Затем высохшую суспензию подвергали воздействию струи воды давлением 2 атм в течение 1 мин. Контролем служили высушенные мазки, не подвергавшиеся воздействию струи воды. Исследуемые мазки после воздействия воды высушивали при комнатной температуре на воздухе, фиксировали, окрашивали по Цилю-Ниль- сену и микроскопировали. Среднее число микобактерий определяли по результатам их подсчета в 50 полях зрения. Опыты проводили в шести кратной повторности.

Зависимость адсорбции Mycobacterium bovis var. BCG, Mycobacterium avium и Mycobacterium fortuitum от гранулометрического состава почвы изучена с использованием почвенных фракций, содержащих гранулы разных размеров. Всего в опыт взято 6 фракций: с частицами диаметром более 0,25 мм; 0,25-0,05; 0,05-0,01; 0,01-0,005; 0,005-0,001 и менее 0,001 мм. Из сухой стерильной навески массой 1 г каждой фракции готовили взвесь на дистиллированной воде объемом шесть мл. Взвесь делили на три равные части и доводили реакцию среды каждой части соответственно до pH 5,0, 7,0 и 9,0.

Во взвеси почвенных частиц вносили по 0,5 мл суспензии соответствующей культуры в концентрации 1 мг/мл.

После 10-минутного встряхивания и 10-минутного отстаивания смеси из поверхностного слоя готовили по шесть мазков препаратов, распределяя 0,1 мл жидкости на 4 см² площади стекла.

Мазок высушивали, фиксировали, окрашивали по Цилю-Нильсену и микроскопировали, подсчитывая в 50 полях зрения количество микобактерий. Опыт проведен в шестикратной повторности. Контролем служили мазки, приготовленные из суспензии Mycobacterium bovis var. BCG в концентрации, соответствующей опытным смесям.

• [1] При изучении адсорбции микобактерий пользовались методами Е.В. Диановой и А.А. Ворошиловой (1925), Д.Г. Звягинцева (1959, 1973, 1987), С.Н. Виноградского (1952) в собственной модификации (патент 2210667 Рос. Федерация, МПК Е21 В 49/02), В.Н. Кисленко, С.А. Королев, 2001; В.Н. Кисленко,2010.