Жидкостная хроматография

Метод хроматографии с использованием жидкой ПФ называют жидкостной хроматографией. В жидкостной хроматографии первым был реализован адсорбционный механизм в форме жидкостнотвердофазной хроматографии. Распределительный механизм лежит в основе жидкостъ-жидкостной хроматографии. К ней относят нормально-фазовую и обращенно-фазовую хроматографии. Явления ионного обмена реализованы в ионообменной хроматографии. Ионной хроматографией называют высокоэффективную ионообменную хроматографию.

Разделение молекул на пористом материале в соответствии с их размерами (молекулярно-ситовой эффект) положено в основу эксклю- зионной хроматографии. Методы эксклюзионной хроматографии называют гель-хроматографией.

В большинстве случаев нельзя выделить какой-то один определенный механизм разделения.

Высокоэффективная жидкостная хроматография

Общая принципиальная схема устройства высокоэффективного жидкостного хроматографа (ВЭЖХ) показана на рис. 4.8. В комплект входят: емкости для растворителей и ПФ, система ввода пробы, система насосов, предколонка, разделяющая колонка, детектор.

Емкости для жидкостей изготавливают из нержавеющей стали или стекла. Жидкости не должны содержать растворенные газы и взвешенные частицы. Растворенные газы удаляют продувкой гелия или обработкой ультразвуком. Для удаления твердых частиц растворы фильтруют через микропористый фильтр под вакуумом.

Различают градиентный и изократический режимы элюирования (рис. 4.9). В иэократическом режиме через колонку подают подвижную фазу одного и того же состава непрерывно. Но при градиентном элюировании разделение улучшается. В данном случае состав ПФ (элюента) в процессе разделения изменяют согласно специально задаваемой программе, при этом сокращается время анализа, полученные пики имеют одинаковую форму и более равномерно расположены на хроматограмме.

Схема устройства высокоэффективного жидкостного хроматографа с предколонкой

Рис. 4.8. Схема устройства высокоэффективного жидкостного хроматографа с предколонкой

Изменение состава элюента на основе двухкомпонентной системы метанол-вода во времени при градиентном элюировании

Рис. 4.9. Изменение состава элюента на основе двухкомпонентной системы метанол-вода во времени при градиентном элюировании

Градиент ПФ создают либо в системе высокого, либо низкого давления. В системе низкого давления растворители смешивают на входе насоса. В системе высокого давления каждый растворитель подают отдельно и смешивают только на выходе, что позволяет точно контролировать соотношения компонентов. При этом давление в системе должно оставаться постоянным. Для подачи дозированного объема пробы используют петлю инжектора или автоматические системы, работающие от сжатого воздуха.

Корпуса разделяющих колонок изготавливают из нержавеющей стали или специальных сортов стекла (дюран, пирекс).

При детектировании проводят измерение общего свойства ПФ (показателя преломления, электропроводности) или специфического свойства разделяемых веществ (светопоглощения, флуоресценции, сила тока).

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ   ОРИГИНАЛ     След >