Меню
Главная
Авторизация/Регистрация
 
Главная arrow Экология arrow Зоогигиена. Вода: водоисточники, водоснабжение и основные методы санитарно-гигиенических исследований

Методика проведения исследования

Подготовка к биотестированию. Для проведения биотестирования предварительно разрабатывают программу отбора проб, готовят посуду, оборудование, вспомогательные материалы для отбора проб и проведения биотестирования, пробоотборники, места хранения отобранных проб, а также рабочие места для обработки доставленных в лабораторию проб и исследования их на токсичность. Все процедуры предварительной подготовки должны исключать попадание токсичных, органических и каких-либо других веществ из окружающих предметов или среды в исследуемую воду.

Химически чистую посуду для биотестирования хранят с закрытыми стеклянными притертыми пробками или завинчивающимися крышками в защищенных от пыли ящиках лабораторного стола или на закрытых полках, стеллажах и т.п.

Подготовка культивационной воды. Культивационная вода используется:

  • - для культивирования дафний;
  • - в качестве контрольной при биотестировании;
  • - для разбавления исследуемых вод.

Для подготовки культивационной воды питьевую воду отстаивают в течение 3-7 сут (до полного дехлорирования) в бутылях из бесцветного стекла. При отсутствии питьевой воды удовлетворительного качества допускается использование бутилированной негазированной питьевой воды или поверхностной пресной или грунтовой воды, отобранной вне зоны влияния источников загрязнения и профильтрованной через мембранный фильтр с размером пор 3,5 мкм. Мембранные фильтры перед употреблением тщательно промывают и кипятят в дистиллированной воде не менее 10 мин.

Культивационная вода должна удовлетворять следующим требованиям:

  • - отсутствие органических загрязняющих веществ, хлора, токсических веществ, антагонистических для дафний организмов (синезеленых водорослей) и пищевых конкурентов (простейших, многоклеточных);
  • -pH 7,0-8,5;
  • -жесткость общая от 80 до 250 мг/дм3 (выраженная в СаС03);
  • - температура от +19 °С до +25 °С.

В культивационной воде требуемого качества выживаемость тест-культуры рачков дафний за 48-часовой период биотестирования должна быть не ниже 100%.

При этом 50%-я гибель рачков в конце первых суток экспонирования должна наступать при внесении в нее бихромата калия в диапазоне концентраций 0,9-2,0 мг/дм3. Более низкая чувствительность к данному модельному токсиканту может быть вызвана присутствием в культивационной воде повышенного количества примесей, способных вступать с ним во взаимодействие. В результате этого токсикант становится менее доступным для тест-организма. Для повышения чувствительности биотеста можно разбавить культивационную воду дистиллированной водой в 1,5- 3,0 раза. После разбавления культивационная вода должна быть нетоксичной для рачков и обеспечивать их хорошую плодовитость в маточной и синхронной культуре.

При исследовании вод с повышенным солесодержа- нием (содержание сухого остатка выше 1 г/дм3) проводят предварительную постепенную адаптацию культуры тест- объектов, добавляя небольшими порциями хлористый натрий в культивационную воду (содержание солей по сухому остатку не должно превышать 6 г/дм3).

Получение исходного материала, содержание и кормление дафний, выращивание культуры. Исходный материал для культивирования водорослей, дафний можно получить в лабораториях, занимающихся биотестированием, имеющих культуру требуемой видовой принадлежности.

Культуру дафний выращивают в климатостате Р-2 или эквивалентном приспособлении, обеспечивающем поддержание искусственного освещения лампами дневного света с интенсивностью света от 1200 до 2500 лк, 12-часовой световой и ночной (без освещения) периоды, температуру +20 ±2 °С.

Один или два раза в неделю осуществляют пересадку культуры в свежую культивационную воду (частота пересадки определяется содержанием растворенного кислорода в культиваторах). Для этого воду вместе с рачками осторожно переливают в чистый культиватор так, чтобы накопившийся осадок остался на дне. В чистый культиватор добавляют свежую порцию культивационной воды. Плотность маточной культуры не должна превышать 20-25 особей на 1 дм3 культивационной воды.

Не допускается использование молоди маточной культуры для биотестирования.

Выращивание синхронизированной культуры. Биотестирование воды и водных вытяжек проводят только на синхронизированной культуре дафний. Синхронизированной является одновозрастная культура, полученная от одной самки путем ациклического партеногенеза в третьем поколении. Такая культура генетически однородна.

Рачки, ее составляющие, обладают близкими уровнями устойчивости к токсическим веществам, одновременно созревают и в одно время дают генетически однородное потомство. Получение синхронизированной культуры производится в климатостате.

Для этого отбирают одну самку средних размеров с выводковой камерой, заполненной эмбрионами, и помещают в химический стакан объемом 250 см3, заполненный культивационной водой на 200 см3. Появившуюся молодь переносят в кристаллизатор (25 особей на 1 дм3 воды) и культивируют указанным способом. Полученная третья генерация является синхронизированной культурой и может быть использована для биотестирования в возрасте 6-24 ч.

Чтобы отобрать для опытов одновозрастную культуру, дафний фильтруют с помощью комплекта сит. Взрослые дафнии задерживаются на крупном сите (размер ячеек 1 000-2 200 мкм), а молодые, в возрасте от 6 до 24 ч, - на самом мелком (размер ячеек 450-560 мкм).

Для непрерывного осуществления массовых анализов на токсичность различных сред при большом количестве проб необходимо культивирование 4-5 генетически однородных синхронизированных культур, отличающихся друг от друга по возрасту.

Пересадка плодоносящих самок в свежую культивационную воду осуществляется один раз в неделю. Родившуюся молодь ежедневно отсаживают и используют для биотестирования.

Подготовка корма и кормление. Дафниям необходимо обеспечить комбинированное дрожже-водорослевое питание. В качестве водорослевого корма используют культуру зеленой водоросли Chlorella vulgaris Beijer. Культуру водоросли выращивают в культиваторе КВ-05 в течение 24 ч на 5%-й среде Тамия. Водорослевое кормление маточной и синхронизированной культур дафний производится через каждые 1-2 сут путем добавления в емкости с рачками указанной выше суспензии хлореллы. Количество добавляемой суспензии должно составлять около 1/20 объема маточной и синхронизированной культуры дафний.

Для дрожжевого питания культуры рачков готовят суспензию из 1 г свежих или 0,5 г сухих хлебопекарных дрожжей в 100 см3 дистиллированной воды. После набухания суспензию тщательно перемешивают. Допускается хранить дрожжевую суспензию в холодильнике 1-2 сут. Кормление дрожжами производится 1 раз в неделю путем добавления по 3 см3 тщательно перемешанной дрожжевой суспензии на 1 дм3 культуры рачков. Водорослевого корма в этот день дают в 3 раза меньше.

Кормление дафний производят до проведения токсикологического эксперимента. Дафний в опыте не кормят.

Подготовка проб воды к биотестированию. Подготовка производится согласно рекомендациям «Методики определения токсичности воды и водных вытяжек из почв, осадков сточных вод, отходов по смертности и изменению плодовитости дафний», ФР. 1.39.2007.03222.

Активный хлор, используемый для обеззараживания питьевых и сточных вод, является токсическим веществом, поэтому перед биотестированием питьевых вод, а также при необходимости анализа сточных вод после системы хлорирования хлор следует удалить из исследуемой воды отстаиванием пробы с открытой крышкой при температуре от +2 до +4 °С не менее 24 ч.

Проба воды, подлежащая биотестированию, должна иметь pH 7,0-8,2, если pH пробы выходит за указанные пределы, в отдельном эксперименте устанавливают токсичность, вызываемую водородным показателем. Затем определяют токсичность воды после нейтрализации пробы. Подкисление осуществляют 10%-м раствором НС1, подщелачивание - 10 %-м раствором NaOH. После нейтрализации пробы аэрируют 10-20 мин для стабилизации pH. Регулирование pH не должно вызывать химической реакции с веществами, присутствующими в пробе (выпадение осадка, ком- плексообразование) и не должно более чем на 5 % изменять концентрацию исследуемых вод.

При исследовании грунтовых или других вод с содержанием железа двухвалентного более 1 мг/дм3 (валовая форма) необходимо предварительное отстаивание проб не менее 24 ч при температуре от +2 до +4 °С. Осветленную воду сифонируют и анализируют на токсичность.

Приготовление разбавлений исследуемых вод для биотестирования. Приготовление производится согласно рекомендациям «Методики определения токсичности воды и водных вытяжек из почв, осадков сточных вод, отходов по смертности и изменению плодовитости дафний», ФР. 1.39.2007.03222.

Для приготовления разбавлений исследуемых вод используется культивационная вода. Предварительно перед приготовлением необходимых разбавлений воды для исследования подготавливают соответствующей емкости посуду, в которой будут готовить растворы. Объем используемой посуды должен на 1/3 превышать необходимый объем приготавливаемого разбавления исследуемых вод.

Перед приготовлением разбавлений нужно подготовить по возможности два одинаковых сосуда: один для разбавления, а другой для хранения раствора (может случиться, что в ближайшие часы процедуру биотестирования в определенном разбавлении необходимо будет повторить). Как во время приготовления разбавлений, так и при их хранении бутыли или другая посуда обязательно должны быть закрыты предварительно подобранными пробками и снабжены надписями о приготовленной концентрации исследуемых вод. Приготовление растворов, разбавлений, проведение биотестирования выполняют при комнатной температуре. Температура культивационной и исследуемой воды должна быть также доведена до комнатной перед приготовлением разбавлений.

 
Посмотреть оригинал
Если Вы заметили ошибку в тексте выделите слово и нажмите Shift + Enter
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >
 

Популярные страницы