Меню
Главная
Авторизация/Регистрация
 
Главная arrow Математика, химия, физика arrow Биоорганическая химия

Определение первичной структуры пептидов и белков

Первым белком, структуру которого в 1953 г. установил Ф. Сэнджср, был гормон инсулин, содержащий остатки 51 аминокислоты. В настоящее время известна аминокислотная последовательность многих ферментов, например ри- бопуклеазы, содержащей 124 аминокислотных остатка, химотрипсипогена — 245 остатков, а также белков — миоглобина (153 аминокислотных остатка), а- (141) и (3-цспи гемоглобина (146).

Установление первичной структуры белка служит основой для определения вторичной и третичной структур, позволяет выяснить расположение функциональных групп в активном центре белка и открывает путь к пониманию механизма функционирования белка. Исследование первичной структуры «мутантных» белков позволяет на молекулярном уровне выяснить характер наследственных болезней.

Определение первичной структуры белков, т.с. аминокислотной последовательности, включает следующие основные этапы:

  • 1) выделение белка из тканей;
  • 2) определение индивидуальности, т.е. чистоты, белка;
  • 3) определение качественного и количественного аминокислотного состава;
  • 4) частичный гидролиз белка па отдельные пептиды;
  • 5) выделение отдельных пептидов;
  • 6) определение N-концевой и С-концсвой аминокислотной последовательности в пептидах;
  • 7) реконструкция аминокислотной последовательности белка па основании сопоставления структуры пептидов.

Выделение белков из тканей.

Большинство методов позволяет выделять гидрофильные (растворимые) белки. Однако в последние годы разработаны методы выделения и гидрофобных белков с использованием ионных и неионных детергентов (додецилсульфат натрия, холат натрия, соли желчных кислот и др.).

Для выделения определенного белка богатую данным белком ткань гомогенизируют (размельчают) в буферных растворах с определенным значением pH и ионной силой при температуре 0-4 °С. Затем полученный экстракт подвергают разделению па индивидуальные белки методами электрофореза в полиакриламидном геле, ультрацентрифугированием или изоэлектрическим фокусированием в градиенте pH.

 
Посмотреть оригинал
Если Вы заметили ошибку в тексте выделите слово и нажмите Shift + Enter
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ ОРИГИНАЛ   След >
 

Популярные страницы